Zanimiva dejstva o odkritju insulina

Prvo zdravilo za insulin, ki je uspelo rešiti človeško življenje, je bilo leta 1922 predstavljeno bolnemu najstniku. Narejena je bila iz trebušne slinavke krave, pred pridobivanjem zdravila pa so bila potrebna stoletja mukotrpnega dela, odkritij in spletk, mnogi pa se še vedno prepirajo, kdo je odprl insulin, čeprav so avtorji prejeli Nobelovo nagrado.

Študija

Človeštvo je vedelo za sladkorno bolezen od časa stare Grčije: opažanje, da voda v pacientovem telesu ne ostane, se nenehno žeja, Areteus iz Kapadokije je bolezen imenoval "diabayno" - "prehod skozi". Do začetka dvajsetega stoletja je bilo veliko znanega o sladkorni bolezni in pri tem so imeli psi pomembno vlogo. Poskuse smo izvajali kruto: živali so odstranile trebušno slinavko, nato so znanstveniki opazili rast sladkorja v telesu (določena je bila količina glukoze v urinu in spremljani simptomi bolezni). Tako je bilo dokazano, da je sladkorna bolezen neposredno povezana s trebušno slinavko.

Znanstvenik iz Rusije, Leonid Sobolev, je bil prvi, ki je odkril, da za razvoj sladkorne bolezni niso odgovorne vse trebušne slinavke, temveč le del celic (Langerhansovi otočki). To je storil leta 1900, ko je vezal izločilni kanal trebušne slinavke za psa, kar je pripeljalo do njegove atrofije, a ker so Langerhansovi otočki ostali nedotaknjeni, žival ni razvila sladkorne bolezni. Čeprav se je znanstvenik iz Rusije gibal v pravo smer, je umrl, ne da bi končal raziskavo.

Nato so znanstveniki ugotovili, da razvoj bolezni prizadene pomanjkanje biološko aktivnih snovi, ki se proizvajajo v teh celicah in prispevajo k absorpciji glukoze v telesu in za njegovo proizvodnjo (leta 1916 je nemški Charpy-Schafer navedel te snovi: latinska beseda insula pomeni otok)..

Zamisel, da se sladkorna bolezen lahko zdravi z injiciranjem insulina, se je pojavila skoraj takoj, ko je bila odkrita, vendar so bili vsi poskusi neuspešni. Get hormon v svoji čisti obliki ni deloval, in pri požiranju zdravilo je bilo uničeno zaradi delovanja prebavnih sokov.

Prvo sintezo insulina bi lahko naredil francoski raziskovalec GLay. Injiciral je v kanale trebušne slinavke pesjega olja, kar je privedlo do atrofije organa, medtem ko so Langerhansovi otočki ostali nedotaknjeni. Od atrofirane žleze je Gley naredil raztezanje in injiciral psa, ki je zaradi odstranjene trebušne slinavke razvil sladkorno bolezen. Žival ni umrla, medtem ko je zdravilo injicirano v njeno telo.

Gley ni pripisal nobenega pomena svojemu odkritju, podal podrobne opise raziskav, leta 1905 pa je deponiral Pariško biološko društvo za skladiščenje, kjer so dolga leta zbrali prah v sefu.

Sinteza

Uradno verjamemo, da je prva oseba, ki je ugotovila, kako narediti sintezo insulina, kanadski, Frederick Banting, ki je delil svojo idejo s profesorjem Johnom MacLeodom: za eksperimente je bil potreben laboratorij z dobro opremo, MacLeod pa ga je lahko zagotovil. Najprej je profesor zavrnil dodelitev prostora za poskuse in se je strinjal samo zato, ker naj bi potoval v Evropo in mu laboratorija ni posebej potreboval.

Zato je bilo sodelovanje pri razvoju minimalno in je dejal, da je treba ob vrnitvi z počitnic vsa dela zaključiti, torej dva meseca pozneje (znanstveniki niso izpolnili roka, ki ga je določil McLeod, profesor, ki se vrača, pa jih je želel iztrebiti iz laboratorija, vendar ga je uspel prepričati). Pomoč Bantingu je vzela enega najbolj obetavnih študentov medicine Charlesa Besta, ki ga je zelo zanimala ideja sinteze insulina.

Prvi poskusi so izvedli Banting in Best na psih. Prejeli so izvleček psa iz atrofirane trebušne slinavke (trajalo je približno dva meseca), potem pa so dali injekcijo živali v komi, ki je bila odstranjena iz žleze. Dejstvo, da so na pravi poti, je postalo jasno, ko je žival preživela sedem dni po injekciji in je zapustila komo, ko je bilo zdravilo injicirano in spadalo v njo, če ni bila dana injekcija. V tem času so znanstveniki stalno merili raven glukoze. To je bil prvič, da je kdorkoli prišel iz diabetične kome (v tistem času ni bilo znano o raziskavah Francozov).

Zgodba se je začela kasneje: znanstveniki niso izdali patenta in prenesli pravice do odprtja univerze. MacLeod, ko je razumel pomen odkritja, je začel svoje aktivno delo, pritegnil vse perspektivne zaposlene in začel proizvajati insulinska zdravila. Posebno vlogo pri tem je imel biokemik John Collip: uspel je tako, da ni bilo potrebe po vezavi kanalov in čakalnem času, dokler se pankreas ne atrofira.

Znanstveniki so preusmerili svojo pozornost s psov na krave in čez nekaj časa so odkrili, da imajo zarodki veliko več Langerhansovih otočkov kot odrasle živali. Rezultati z vsako izkušnjo so bili vedno bolj uspešni, znanstveniki pa so lahko podaljšali življenje psa na sedemdeset dni. Leta 1922 je zdravilo najprej predstavilo umirajočemu dečku in ga vrnilo v življenje.

Nagrada

Po tem je MacLeod na sestanku Združenja ameriških zdravnikov pripravil poročilo, ki ga je spremenilo, kot da je odkril. Hkrati je začel aktivno promovirati zdravilo, saj je imel za to povezave. O vlogi Bantinga ni mogel molčati, vendar je bila vloga drugih znanstvenikov zmanjšana. Zato je bila Nobelova nagrada za odkritje insulina podeljena samo njemu in Bantingu.

Z dejstvom, da je MacLeod dobil nagrado, Best pa je ostal brez dela, se je Basting močno razhajal in javno začel govoriti o tem, kako so bili eksperimenti izvedeni, o vlogi MacLeoda in ne pozabili omeniti, kaj palice vstavijo v kolesa uglednega znanstvenika. Velik škandal je pripeljal do tega, da nihče ni odšel, da bi prejel nagrado, kasneje pa je bil razdeljen med štiri znanstvenike: Basting se je delil z Bestom, Mcleod z Collipom.

Francoski znanstvenik Gray se je, ko je izvedel za nagrado, odločil, da bo dokazal, da je avtor izuma, za katerega so bile njegove zapiske pripravljene v prisotnosti prič. Umiril se je šele po tem, ko je Hermann Minkowski, ki se je rodil v Litvi, ki je bil takrat del Rusije, a živel in delal v Nemčiji, povedal o možnosti, da bi Francoza prišel na sodišče zaradi skrivanja informacij, ki bi lahko rešile več kot eno življenje. tisoč ljudi.

Proizvodnja zdravil

Od leta 1926 se proizvodnja insulina postavlja na veliko stopnjo, izdelujejo jo vodilne farmacevtske družbe in v zadnjem času proizvaja jeklo v Rusiji. Sprva je bil hormon narejen iz trebušne slinavke goveda, vendar je pogosto povzročal alergije, saj se ni ujemal s tremi aminokislinami človeka.

Nato so začeli izdelovati svinjski insulin (razlika v eni aminokislini), ki jo človeško telo bolje absorbira, možne pa so tudi alergije. Zato je bila sprejeta odločitev za proizvodnjo sintetičnega insulina, ki bi bil popoln analog človeka. Tukaj je reševal genetski inženiring, predvsem biokemija.

Pred tem je treba opozoriti, da so vsi proteini polimeri, sestavljeni iz fragmentov aminokislin. Hkrati so v tvorbo polimerov, potrebnih za proizvodnjo insulina, vključene samo aminokisline, ki imajo med karboksilno skupino in amino skupino le en ogljikov atom.

Čeprav je veliko aminokislin, le 51 aminokislinskih ostankov sodeluje pri tvorbi insulina, zaradi česar je hormon ena najkrajših beljakovinskih verig.

Da bi dobili insulin, moramo aminokisline povezati v strogo določenem vrstnem redu (sicer lahko dobimo molekulo, ki nima nič skupnega s tem, kar živ organizem proizvaja), kar je bilo opravljeno med poskusi.

Po določenem času so lahko znanstveniki s pomočjo genskega inženiringa in biokemije organizirali proizvodnjo insulina, da bi v poseben hranilni medij spravili seve kvasovk in gensko spremenjenih E. coli, ki so sposobni proizvajati humani gensko spremenjen insulin. Količina proizvedene snovi je bila tako velika, da znanstveniki verjamejo, da bo tako redčenje hormonov kmalu nadomestilo insulin živalskega izvora.

Shranjevanje

Po uradnih podatkih število diabetikov v Rusiji presega tri milijone ljudi, zato se veliko pozornosti posveča proizvodnji insulina. Trenutno je Rusija razvila tehnologijo za proizvodnjo gensko spremenjenega insulina. Toda število zdravil, ki jih proizvede Rusija, za tako veliko bolnikov ni dovolj. Zato, poleg insulina, sproščenega v Rusiji, država kupi veliko število zdravil v tujini, kar zagotavlja potrebne pogoje za shranjevanje insulina v skladiščih.

Ko govorimo o shranjevanju insulina v Rusiji, je treba opozoriti, da se neodprta viala običajno shrani približno dve do tri leta. Za zagotovitev, da se insulin ne poslabša, je zelo pomembno upoštevati pogoje shranjevanja insulina. Pred shranjevanjem insulina je treba upoštevati, da je idealna temperatura shranjevanja od 6 do 8 ° C.

Shranjevanje insulina je zaželeno na stranskih vratih, stran od zamrzovalnika (zamrzovanje je nesprejemljivo, ker se njegova struktura spreminja). Nekaj ​​ur pred injiciranjem in redčenjem ga morate izvleči iz hladilnika in držati pri sobni temperaturi.

Odprta viala je shranjena pri sobni temperaturi (do 25 ° C), stran od sončne svetlobe in ogrevalnih naprav. Uporabljajte največ štiri tedne. Če postane raztopina motna, se pojavi oborina, ki ni primerna in jo je treba zavreči.

Zgodovina odkrivanja insulina

Že veliko let pred odkritjem insulina se je sladkorna bolezen štela za smrtonosno bolezen. Edina znana metoda zdravljenja bolezni, ki se je pokazala z izčrpavajočo sproščanjem velikih količin sladkega urina, je bila stroga prehrana, ki jo je predlagal dr. Taki bolniki bi lahko podaljšali življenje za več let, vendar jih je neizogibno čakala boleča smrt.

V 60. letih 18. stoletja je nemški študent Paul Langergans med preučevanjem trebušne slinavke odkril "majhne celice z briljantnimi vsebinami, razporejene v skupine naključno po celotni pankreasu." Njihova funkcija je bila neznana. Kasneje, v čast znanstveniku, so se te skupine teh celic imenovale Langerhansovi otočki. Leta 1889 je slavni znanstvenik Oscar Minkowski (1858-1931) ugotovil, da se diabetes mellitus razvije pri psih z oddaljeno trebušno slinavko. Vendar pa so nadaljnji poskusi pokazali, da če se kanal poveže, skozi katerega sok pankreasa vstopi v črevo, se pojavijo težave s prebavo, vendar se raven glukoze v krvi ne bo povečala. Na podlagi svojih poskusov je Oskar Minkowski sklenil, da ima trebušna slinavka dve funkciji: proizvaja prebavne sokove in snov, ki se sprosti neposredno v kri in uravnava ravni glukoze. Primer je ostal majhen, da bi izolirali to snov in našli zdravilo za sladkorno bolezen. Ampak prav to pa znanstveniki niso mogli narediti več let.

Oktobra 1921, v kanadskem mestu Toronto, je Frederick Banting, kirurg, ki je pred kratkim prejel zdravniško diplomo, prebral članek dr. Mosesa Barrona o povezavi med Langerhansovimi otočki in nastopom sladkorne bolezni. V zvezi z delom ruskega znanstvenika Leonida Vasiljeviča Soboljeva je dr. Barron opisal klinični primer, v katerem je kanal pankreasa blokiran s kamnom, ki je povzročil poškodbo tkiva organa, vendar so celice otočkov ostale nepoškodovane. Bunting je poskušal izolirati te celice. Predlagal je, da so prebavni sokovi trebušne slinavke lahko usodni za celice otočkov.

V svojem dnevniku je zapisal:

  • zavoj pankreatičnega kanala v psa. Počakajte na popolno atrofijo organskega tkiva in ohranjate celice otočkov žive;
  • poskusite te celice čim bolj izolirati iz prebavnih sokov in jih izolirati.

Frederick Grant Banting.

Od odkritja insulina 1982, Michael Bliss, založba Chicago University.

V začetku leta 1921 se je Banting s svojo idejo obrnil na profesorja na Univerzi v Torontu, Johna MacLeoda, enega najbolj uglednih znanstvenikov tistega časa, ki je študiral diabetes. MacLeod se ni strinjal z Bantingovim navdušenjem, do takrat je bilo na svetu narejenih veliko poskusov izolacije celic otočkov z veliko bolj izkušenimi znanstveniki in vsi niso privedli do uspeha. Vendar pa je Frederick Bantting uspel prepričati McLeoda, da daje idejo priložnost, mladi znanstvenik je dobil majhen, slabo opremljen laboratorij in 10 psov. Za Bantinga je bil priključen tudi asistent študent medicine Charles Best. Poskus se je začel poleti 1921.

John MacLeod

(Journal of Laboratory and Clinical Medicine, številka 20, str. 1934-35).

Na začetku poskusov niti Banting niti Best niso imeli izjemnih teoretičnih znanj in praktičnih veščin. Profesor Mcleod je Besto naučil, da je nemudoma odstranil trebušno slinavko in dal nekaj praktičnih nasvetov, kmalu pa je odšel na poletne počitnice v svoji rodni Škotski. Tudi v tem času je obstajala nova metoda za določanje koncentracije glukoze v krvi, ki je zahtevala le 0,2 ml krvi in ​​ne 25 ml kot prej. Ta preboj je igral veliko vlogo pri odkritju insulina, saj je bilo težko oceniti učinkovitost snovi, pridobljene brez določanja ravni glukoze v krvi, in pogoste krvne preiskave z uporabo starih metod so privedle do izčrpanja že tako slabih bolnikov.

Banting in Best so začeli s poskusi z odstranitvijo trebušne slinavke pri eksperimentalnih psih, kar je povzročilo povečanje ravni glukoze v krvi, pogosto uriniranje, žejo in izgubo telesne teže. Psi so razvili sladkorno bolezen.

V drugi skupini psov je bil kanal pankreasa vezan, del, ki proizvaja prebavne sokove, je bil atrofiran. Pri eksperimentalnih psih je bila trebušna slinavka izrezana in zamrznjena v raztopini soli, nato pa filtrirana. Izolirana snov, imenovana "Ailetin". Nastala snov je bila dana psom s sladkorno boleznijo, raven glukoze v krvi se je zmanjšala. Prejemali so več injekcij na dan, simptomi diabetesa so izginili iz psov, zdeli so se zdravi in ​​močni. Banting in Best sta rezultate pokazala MacLeodu, bil je presenečen, vendar je zahteval dodatne teste za potrditev rezultata.

Frederick Banting in Calz Best na strehi Univerze v Torontu, 1921.

Znanstveniki so razumeli, da so za nadaljnje raziskave potrebovali večjo količino aktivne sestavine, odločili so se za uporabo trebušne slinavke goveda. Število uspešnih poskusov se je povečalo, MacLeod je spoznal, da so znanstveniki na robu največjega odkritja in izbrali večji laboratorij za poskuse, ki mu zagotavljajo vse potrebne vire. Prav tako je predlagal, da se ime snovi, pridobljene insulina. Poskusi so se nadaljevali.

Konec leta 1921 se je k skupini znanstvenikov pridružil še drugi udeleženec - biokemičar Bertram Kollip. Njegov cilj je bil očistiti nastalo snov, tako da se lahko uporablja za zdravljenje ljudi. Prav tako so znanstveniki med študijo ugotovili, da lahko celotno trebušno slinavko uporabimo brez dolgotrajnega procesa atrofije njegovega prebavnega dela.

Znanstveniki so želeli začeti uporabljati insulin pri ljudeh. Banting in Best sta si sama poskušala injicirati insulin, toda razen slabosti in mrzlice ni bilo nobenih drugih pojavov. 11. januarja 1922 je prvič v Toronto uvedel inzulin 14-letni deček Leonard Thompson, ki je trpel za sladkorno boleznijo, čigar edino zdravljenje je bila izčrpana hipohidratna dieta. Žal prva injekcija ni privedla do želenih rezultatov, raven glukoze v krvi se je zmanjšala, vendar je le malo mesto injiciranja postalo vneto. Biokemičar Bertram Collip je nadaljeval z delom na čiščenju insulina. 23. januarja je bila istemu bolniku ponovno dana injekcija insulina. Rezultat je bil nihajoč, raven glukoze se je znižala z 29 mmol / l na 6,7 ​​mmol / l. Bolnik se je vsak dan bolje počutil, postopoma pridobival moč in težo. Znanstveniki so nadaljevali s testiranjem insulina na drugih bolnikih s sladkorno boleznijo.

Novice o odkritju insulina so hitro preletele ocean, leta 1923 pa je Nobelov odbor podelil Bantingu in Macleodu Nobelovo nagrado za fiziologijo in medicino. To je bil velik uspeh. Vendar pa je bil Frederick Banting besen na odločitev Nobelovega odbora, verjel pa je, da bi moral z Charlesom Bestom deliti uspeh. Da bi poklonili Bestovemu prispevku k odkritju insulina, mu je Banting dal polovico svojega dela Nobelove nagrade, MacLeod pa je delil svojo vlogo z Bertramom Collipom. Razprava o pravičnosti Nobelove nagrade se že dolgo ni umirila. Kljub temu, da so mnogi sodobniki verjeli, da Mcleod ni zaslužil za nagrado, ni mogoče zanikati njegovega prispevka k odkritju insulina, saj je bil on tisti, ki je dal idejo o Bantingu, da mu je dala laboratorij in dala dragocene nasvete že od samega začetka študije. Prav tako je treba priznati, da se brez povezav profesorja MacLeoda novice o odkritju niso razširile tako široko in morda so se za odkritjem insulina soočala tudi imena drugih ljudi.

Banting in McLeod sta prejela patent za svoj izum, ki sta bila za 1 $ prodana Univerzi v Torontu, ves denar, od katerega je bila porabljena, dobila fundacija, ki financira raziskave.

Kmalu po odprtju je podjetje Eli Lilly začelo s široko proizvodnjo snovi. Do leta 1923 je podjetje proizvajalo dovolj insulina za oskrbo vseh bolnikov na severnoameriški celini. Insulina je v Evropo prinesel Nobelov nagrajenec Augustus Krokh.

Kljub dejstvu, da insulin ni zdravilo za sladkorno bolezen, je njegovo odkritje eden največjih prebojev znanosti dvajsetega stoletja. Sladkorna bolezen je prenehala biti stavek, kar pomeni, da je osebi ostalo le še nekaj mesecev, da živi v muci. Ljudje s sladkorno boleznijo so imeli priložnost živeti srečno in dolgo življenje.

Zgodovina odkrivanja insulina

»Da bi pacient lahko sam zaupal svojemu življenju, mora dobro obvladati definicijo odmerka in dajanje insulina zelo dobro,« je povedal J. Macleod, ki je leta 1923 odprl insulin, podelil Nobelovo nagrado za fiziologijo in medicino.

Terapija z insulinom je ena najpomembnejših metod zdravljenja sladkorne bolezni (z diabetesom tipa 1). Zahvaljujoč njej je sladkorna bolezen prenehala biti smrtonosna bolezen, ki v nekaj mesecih vodi v smrt. Kot že vemo, je bil insulin prvič uporabljen za zdravljenje leta 1922, pot do tega pa ni bila lahka.

Vse se je začelo z dejstvom, da sta leta 1889 Oscar Minkowski in Joseph von Mehring povzročila poskusno sladkorno bolezen v psa, pri čemer je odstranila trebušno slinavko. Leta 1901 je ruski patolog Leonid Sobolev dokazal, da je sladkorna bolezen povezana z motnjo v delovanju ne celotne trebušne slinavke, temveč samo tisti del, ki se imenuje Langerhansovi otočki, in da so ti otočki vsebovali nekaj snovi, ki uravnavajo presnovo ogljikovih hidratov. Sobolev ni uspel izolirati te snovi v čisti obliki.

Prvi poskus tega je leta 1908 opravil Georg Ludwig Zulzer. Nemški strokovnjak je lahko izvlekel izvleček iz trebušne slinavke, s katerim je neuspešno poskušal zdraviti bolnika, ki je umrl zaradi sladkorne bolezni - stanje bolnika se je začasno izboljšalo. Vendar je izvleček končal in človek je umrl. Leta 1911 je Zülzer poskusil patentirati svoje odkritje, vendar ga ni mogel takoj narediti, med prvo svetovno vojno pa je bil njegov laboratorij zaprt, približno v istem času, leta 1911 - 1912, je E. Scott, ki je delal na Univerzi v Chicagu, uporabljal vodni ekstrakt. pankreas za zdravljenje psov z eksperimentalno inducirano sladkorno boleznijo in ugotovil, da se je raven sladkorja v krvi laboratorijskih živali nekoliko zmanjšala. Vendar pa Scott ni bil namenjen logičnemu zaključku - njegov upravitelj se je izkazal za kratkovidnega in je ustavil delo laboratorija v tej smeri. Izrael Kleiner, ki je na tem problemu delal leta 1919 na Rockefellerjevi univerzi, je prav tako nesrečen: gospodarska kriza, ki je sledila prvi svetovni vojni, je prekinila njegove raziskave.

F. G. Banting (1891-1941)

Frederick Grant Banting je imel svoje rezultate z diabetesom - njegov prijatelj je umrl zaradi te bolezni. Po diplomi na medicinski šoli v Torontu in po opravljanju vojaškega kirurga na področju prve svetovne vojne je postal docent na medicinski fakulteti Univerze v zahodnem Ontariu. Oktobra 1920 je Banting, ko je prebral medicinski članek o vezavi izločilnih kanalov trebušne slinavke, skušal s to metodo uporabiti snov žleze z lastnostmi zniževanja sladkorja. S prošnjo, da mu zagotovi laboratorij za izvajanje poskusov, se je obrnil na Johna MacLeoda, profesorja na Univerzi v Torontu. Višji sodelavec je bil bolje seznanjen z raziskavami na tem področju in menil, da so neperspektivni, vendar je bil mladi znanstvenik tako vztrajen, da ga Macleod ne more zavrniti.

Profesor je Bantingu zagotovil ne le laboratorij, ampak tudi deset psov, in kar je najpomembneje, izbral je asistenta. Bil je višji študent, Charles Best, ki je odlično obvladal metode za določanje krvnega sladkorja in urina (potem pa ni bil tako preprost, kot je danes). Za druge raziskovalne namene je Banting prodal vse svoje premoženje (zgodovina je tiho, kakšna je bila njena velikost, vendar je bila dovolj za poskuse). Medtem ko je MacLeod počival na Škotskem, sta Banting in Best vezala kanale trebušne slinavke psov in napeto čakala na rezultate. Avgusta 1921 so uspeli izolirati želeno snov. Vnos te snovi v psa, prikrajšan za lastno trebušno slinavko in umiranje zaradi ketoacidoze, je bistveno izboljšal stanje živali, raven sladkorja v krvi se je zmanjšala.

V tem času se je Mcleod vrnil. Ko je spoznal rezultate mladih znanstvenikov, je vse sile laboratorija vrgel v nadaljnji razvoj teme. Izolacija snovi, ki se je prvotno imenovala ailetin (v drugi transkripciji, iletin), iz trebušne slinavke psov je bil izredno težaven proces, ker so prebavni encimi uničili molekulu ailetin. Banting je predlagal, da se za te namene uporabi žleze plodov telet, v katerih je insulin že nastajal, in prebavnih encimov, ki so oteževali sproščanje insulina, še ni bilo na voljo. Izkazalo se je, in delo je šlo hitreje. Glavna stvar je, da so ayletin teleta pomagali psom, kljub razlikam med vrstami. Vendar pa je zdravilo povzročilo resne neželene učinke, povezane s prisotnostjo beljakovin in drugih snovi v njem.

McLeod je povabil Jamesa Collipa, biokemičarja, da očisti ayletin. Rezultat ni bil predolg: 11. januarja 1922 je bila prva injekcija aylethina, 14-letnega Leonarda Thompsona, ki je umrl zaradi sladkorne bolezni, dobila prvo injekcijo. Kot pravijo, se je prva palačinka pojavila v grudici: za najstnika se je razvila alergijska reakcija za dajanje zdravila - čistost ni bila zadostna. Collip je sedel v laboratoriju: Leonard je izginil pred njegovimi očmi, čas je iztekel manj in manj. Po 12 dneh je naredil še en poskus. Tokrat je vse potekalo dobro in svet je dobil novo zdravilo. MacLeod je Bantingu predlagal, naj ga imenuje inzulin (od latinščine. Insula - otok, ime se je prvič slišalo leta 1910: endokrinolog Edward Sharpay-Schafer je to vrsto snovi poimenoval, pomanjkanje katerega po njegovih domnevah povzroča diabetes). Zdaj pravimo ta čudežni zdravilo.

Leonard Thompson, ki je bil star 14 let in je tehtal 25 kg, je živel še 13 let relativno aktivnega življenja in umrl zaradi hude pljučnice (antibiotiki takrat niso obstajali in umrljivost zaradi pljučnice je bila visoka). Pljačka Banting je prenesla pravice do patenta za novo zdravilo na Univerzo v Torontu, ko je prejela en dolar za to zdravilo. Bolj pomembno je bilo, da mu je uspelo rešiti življenje svojega drugega prijatelja, zdravnika Joeja Gilchrista.

Potreba po insulinu je bila izredno visoka. Banting je prejel pakete pisem s prošnjami, da bi pomagal umirajočim ljudem... Medtem pa je prvi insulin nadaljeval neželene reakcije - infiltrati (tjulnji) in celo abscesi na mestu injiciranja. Eden od Bantingovih znancev, poslovnež Eli Lilly, je patent kupil na Univerzi v Torontu (danska družba Novo-Nordisk je prav tako dobila licenco) in začela industrijsko proizvodnjo insulina, hkrati pa je vložila precejšnja sredstva v izboljšanje čiščenja. Ustvarjalec Novo-Nordiska je bil zdravnik Avgust Krogh, katerega žena je postala ena prvih bolnikov v Bantingu. Farmacevtska podjetja Eli Lilly in Novo-Nordisk sta še vedno med vodilnimi podjetji na tem področju.

Pravzaprav je treba omeniti, da je leta 1921, nekaj mesecev pred Bantingom in Bestom, romunski raziskovalec Nicolae Paulescu objavil rezultate svojega dela, v katerem je opisal učinek snovi, ki jo je prejel od trebušne slinavke psa, ki jo je imenoval pankreatin. pankreatičnih encimov). Toda zgodba je določila, da znanstvena skupnost teh publikacij ni opazila. Spomnili so jih veliko kasneje...

Leta 1923 sta Banting in McLeod za ustvarjanje insulina prejela Nobelovo nagrado. Zakaj je niso podelili z Bestu in Collipom skupaj z njimi? Člani žirije bi vprašal, ampak... Banting je zgrožen, sploh sploh ni hotel sprejeti nagrade, potem pa se je premislil in prejel denar na polovico z Bestom. MacLeod je storil enako - predal je polovico nagrade Collipu.

Čeprav je sediment, seveda, ostal. Kasneje se je raziskovalna skupina razšla - Bantingu (in morda je bilo tako?) Se je zdelo, da je MacLeod podcenjeval svojo vlogo pri odkritju insulina, Collip pa je podprl profesorja v tem sporu.

Kakorkoli, insulin je začel živeti svoje, ločeno od ustvarjalcev, življenja. McLeod je predaval na Univerzi v Aberdeenu na Škotskem, kjer je dolga leta vodil Oddelek za fiziologijo.

Banting, ki je dobil življenjsko pokojnino, leta 1923 je postal doktor znanosti, profesor, vodil Bantingov inštitut in Best, je bil izvoljen za člana Kraljevega društva v Londonu, imel je še veliko drugih častnih naslovov in regalij, ki pa mu niso preprečevale, da bi se ukvarjal z letalsko medicino. Leta 1941 je med delovnim letom v zvezi z organizacijo medicinske pomoči v vojski umrl v letalski nesreči blizu Newfoundlanda.

V spomin in zahvaljujoč temu človeku je Svetovna zdravstvena organizacija 14. novembra razglasila rojstni dan Fredericka Bantinga - dan boja proti sladkorni bolezni.

Medtem se je delo nadaljevalo. Prvi insulini so bili še vedno slabo očiščeni, odmerki niso bili preverjeni in ni bilo dovolj nadzora glukoze. Hipoglikemija, abscesi na mestu dajanja zdravila, alergijske reakcije - vse to prisiljeno nenehno izboljševati insulin.

Prvi je imel še eno pomanjkljivost - zelo kratek čas. Pogosto jih je bilo treba dajati, zato so se znanstveniki spraševali, kako podaljšati učinek insulina, da bi paciente rešili ponavljajočih se injekcij čez dan. V iskanju snovi, ki upočasni absorpcijo inzulina in posledično podaljša njeno delovanje, so preizkusili številne možnosti: lecitin, gumi arabik, holesterol... Vse je bilo brez uspeha.

Insuline so poskusili obdelati s kislinskimi spojinami za zaščito pred škodljivimi učinki prebavnih encimov trebušne slinavke.

Poleg tega je kislo okolje podaljšalo absorpcijo in s tem podaljšalo trajanje delovanja insulina. Škoda - »kisli« insulini so povzročili veliko lokalnih reakcij: pordelost, bolečina, infiltrati.

Nadaljnja razvojna prizadevanja so bila usmerjena v nevtralizacijo raztopine in izboljšanje stopnje čiščenja. Leta 1936 je danski raziskovalec Hagedorn uspel ustvariti prvi insulin z nevtralno kislino in po 10 letih trdega dela dobil »podaljšan« insulin, ki se je imenoval nevtralni irotamin (NPH). Danes se aktivno uporablja po vsem svetu.

NPH smo pridobili z dodajanjem proteina očiščenega svinjskega insulina posebni beljakovini, protaminu, izolirani iz lososovega milta.

Protamin ima alkalne lastnosti in upočasni absorpcijo insulina iz podkožne maščobne plasti. Skozi dolgo zgodovino uporabe protaminskega insulina obstaja le nekaj poročil o pojavu alergijskih reakcij nanj.

Drug način podaljšanja absorpcije insulina je bila dodajanje cinka protaminskemu insulinu (insulin-cinkova suspenzija - ICS ali protamin cink insulin - PDH), trajanje delovanja pa je odvisno od stanja insulina, če ima kristalno strukturo, zdravilo deluje dlje, če ne kristalni (amorfni) - krajši.

Prvo zdravilo ICS je bilo Lente inzulin, sestavljeno iz 3 delov prašičjega amorfnega in 7 delov govejega kristaliničnega insulina. Kasneje je bil ustvarjen Monotard - vsebuje samo svinjski insulin - 3 amorfne dele in 7 kristaliničnih delov.

Inzulin je v ICS bistveno manjši od protamina, zato jih ni mogoče mešati s „kratkim“ insulinom: slednji se veže na prosti protamin in celotna mešanica se spremeni v dolgodelujoč insulin. Pripravki NPH vsebujejo enako količino insulina in protamina, zato nič ne ogroža »kratkega« insulina z njimi. Ta lastnost je povezana z drugim imenom NPH - izofan-insulin (iz latinščine. Isophan - enak). Ta zdravila so v telesu trajala dolgo časa - 12 ur ali več.

Za praznovanje je bilo odločeno, da se preide na 1-2-kratni režim dajanja insulina, vendar je podaljšanje dela na insulinu imelo kruto šalo pri bolnikih: prenos snovi na eno injekcijo na dan je povzročil močno poslabšanje nadzora sladkorja in posledično dekompenzacijo bolezni. Izkazalo se je, da ta možnost ni primerna za vsakogar - pri sladkorni bolezni tipa 1 ni bilo mogoče doseči nadzora sladkorja na ta način: ali so bili odmerki majhni in glikemija še naprej ostajala nespremenjena, ali so bili odmerki visoki, nato pa so se epizode hipoglikemije spreminjale ena za drugo. Sredina ni delovala. Postalo je jasno, da potrebujemo tako kratke kot dolgotrajne insuline.

To zdaj vemo o izločanju glukoze in inzulina iz bazalnega in post-prehranskega, potem pa je bilo še daleč, znanstveniki pa so bili na več načinov, kar se imenuje, na dotik. Tako smo ugotovili potrebo po individualni izbiri režima insulinske terapije za vsakega bolnika. Poleg protamina in cinka so bile insulinom dodane snovi z dezinfekcijskimi lastnostmi, zaradi katerih vsebina viale ostane sterilna dolgo časa in pri ponovni uporabi inzulinske brizge ali igle se ne razvijejo bakterijski zapleti. Te snovi so prisotne v insulinu v tako majhnih koncentracijah, da ne vplivajo na človeško telo.

Podjetja, ki proizvajajo insuline, uporabljajo različne snovi kot konzervanse, zato je priporočljivo uporabiti tako „kratki“ kot „podaljšan“ insulin istega podjetja. Če pa takšne možnosti ni, kombinacija zdravil različnih proizvajalcev ni izključena, tudi pri vnosu v eno brizgo je najpomembnejše, da „podaljšan“ insulin ne vsebuje cinka.

Insulin je imel srečo, kot nobena druga veverica - za razvoj, ki se nanaša nanj, je bilo podeljenih še dve Nobelovi nagradi: leta 1958 je kemik Frederick Sanger dobil nagrado - uspel je popolnoma dešifrirati aminokislinsko sestavo insulina, ne samo ljudi, ampak tudi različne vrste živali, leta 1964 je zmagala Dorothy Crawfort-Hodgkin, ki je proučevala prostorsko strukturo molekule insulina.

Rekli smo že, da je insulin protein, kar pomeni, da je sestavljen iz verige zaporedno povezanih aminokislin. Krava insulin se razlikuje od človeških treh aminokislin, svinjina - ena. Proučena je bila tudi možnost uporabe insulinov drugih živali, zlasti kitov in rib. Od osemdesetih let prejšnjega stoletja se je kravji insulin začel opuščati. Zakaj je prenehal izdelovati strokovnjake? Dejstvo je, da večja razlika v strukturi in sestavi molekule, pogosteje se v človeškem telesu proizvajajo imunski kompleksi za tuji insulin, ki na eni strani blokira učinek insulina na zniževanje sladkorja (inzulin je vezan na protitelesa, ki se mu zdijo), na drugi strani pa na notranjih stenah krvnih žil, kar poveča njihovo škodo. Zdi se, da je življenje podaljšano, hkrati pa se pospešuje razvoj zapletov sladkorne bolezni, pri čemer je bila vedno prednost dana prašičjem insulinu, čeprav niso bili brez napak.

Nadaljevali smo aktivno iskanje načinov za sintetiziranje insulina, ki bi popolnoma ponovil njegovo strukturo pri ljudeh. Kot rezultat dolgoletnih raziskav leta 1978 je insulin postal prvi človeški protein, ki bi ga lahko sintetizirali z genskim inženiringom.

Takoj, ko so se naučili, kako dobiti humani insulin, so postopoma začeli zavračati svinjino. V številnih državah po svetu je proizvodnja pripravkov iz živalskih organov prepovedana iz etičnih razlogov, vendar se svinjski insulin še vedno zelo pogosto uporablja, zlasti v državah v razvoju, kar je posledica relativno nizkih stroškov te droge.

V naši državi, zdaj v arzenalu endokrinologa so predvsem visokokakovostni humani insulin. Pridobivajo se na različne načine: polsintetično, kadar aminokislino alanin, ki ni primerna za nas v molekuli prašičjega insulina, nadomesti aminokislinska treonin (s čimer se doseže popolna identiteta proizvoda, dobljenega za humani insulin), in biosintetično, pri uporabi genskega inženiringa, da sintetizirajo proinzulin., od katerega je kasneje odstranjen C-peptid, ki nam je že znan.

Tehnologija slednje metode je približno enaka v DNK Escherichia coli ali glivici kvasovk, vstavita človeški gen proinzulina in gostiteljska celica nove DNA začne sintetizirati humani proinzulin. Nato se odcepi C-peptid, preostali insulin se očisti iz nečistoč celic gostiteljske beljakovine, stabilizira in podaljša s protaminom ali cinkom (v primeru "podaljšanega" insulina), konzervansi se injicirajo, vse to je pakirano in kar je potrebno je pridobljeno - rekombinantni gensko spremenjeni humani insulin. Prav te insulinske možnosti se danes najpogosteje uporabljajo. V zadnjih letih so se razvili in aktivno izvajali tako imenovani analogi humanega insulina: njihova aminokislinska sestava je enaka kot pri slednji, vendar se je zaporedje aminokislinskih spojin spremenilo. To je omogočilo spremembo glavnih značilnosti ukrepa: začetni čas, čas največjega dogodka in njegovo resnost, pa tudi trajanje.

Preglednica št. 61. Insulini, ki se uporabljajo pri bolnikih s sladkorno boleznijo (po Dedov II, Shestakova M.V., 2009)

Zgodovina insulina. Poglejte v preteklost

Po podatkih Mednarodne diabetične zveze z diabetesom mellitusom je trenutno 542.000 otrok, mlajših od 14 let, 415 milijonov odraslih in do leta 2040 naj bi število ljudi s sladkorno boleznijo doseglo 642 milijonov ljudi 1.

Povečanje števila sladkornih bolnikov je vsekakor povezano s spremembami življenjskega sloga (zmanjšanje telesne aktivnosti), prehranjevalnimi navadami (uživanje živil, bogatih z lahko prebavljivimi ogljikovimi hidrati, živalskimi maščobami), hkrati pa kaže, da zaradi odkritja sodobnega zniževanja sladkorja zdravil, ustvarjanje metod za obvladovanje bolezni, razvoj algoritmov za diagnosticiranje in zdravljenje zapletov sladkorne bolezni, pričakovana življenjska doba ljudi s sladkorno boleznijo se je začela povečevati, da ne omenjam izboljšanja njene kakovosti. _________

Človeštvo je poznalo sladkorno bolezen že 3,5 tisoč let (kot je znano, prva razprava, ki opisuje bolezen, egiptovski papirus Herbes, sega v leto 1500. pr. N. Št.), Vendar se je le 90 pojavilo pri zdravljenju te resne bolezni. pred leti, ko je sladkorna bolezen, tudi prva vrsta, prenehala biti smrtna kazen.

Predpogoji za ustvarjanje insulina

Že v 19. stoletju so med obdukcijo bolnikov, ki so umrli zaradi sladkorne bolezni, opazili, da je bila v vseh primerih trebušna slinavka hudo poškodovana. V Nemčiji leta 1869 je Paul Langergans odkril, da v tkivih trebušne slinavke obstajajo določene skupine celic, ki niso vključene v proizvodnjo prebavnih encimov.

Leta 1889 je v Nemčiji fiziolog Oscar Minkowski in zdravnik Joseph von Mehring eksperimentalno dokazal, da odstranitev trebušne slinavke pri psih vodi k razvoju sladkorne bolezni. To jim je omogočilo, da domnevajo, da trebušna slinavka izloča določeno snov, ki je odgovorna za telesno kontrolo presnove 2. Hipoteza Minkowskega in Meringe sta odkrila nove in nove potrditve, v prvem desetletju 20. stoletja pa je preučevala razmerje med sladkorno boleznijo in otočkom Langerhansovega otočka, odkritjem endokrinega izločanja, dokazano, da ima določena snov, ki jo izločajo Langerhansove celice otočkov vodilno vlogo pri uravnavanju presnove ogljikovih hidratov 3. Pojavila se je zamisel, da se lahko, če se ta snov izolira, uporabi za zdravljenje sladkorne bolezni, vendar pa se rezultati nadaljevanja poskusov Minkowskega in Merkinga, ko so ekstrakti dali psom po odstranitvi trebušne slinavke, ki so v nekaterih primerih povzročili zmanjšanje glikozurije, niso bili ponovljivi, uvedba ekstrakta pa je povzročila povišanje temperature in druge stranske učinke.

Evropski in ameriški znanstveniki, kot sta Georg Sulzer, Nicola Paulesko 4, Israel Kleiner, so uvedli ekstrakt trebušne slinavke za diabetične bolnike, vendar zaradi velikega števila stranskih učinkov in težav, povezanih s financiranjem, niso uspeli zaključiti poskusov.

Ideja Fredericka Bantinga

Leta 1920 je Frederic Banting, 22-letni kirurg, poskušal odpreti svojo prakso v majhnem kanadskem mestu in mimogrede poučevati na Univerzi zahodnega Ontarija. V ponedeljek, 31. oktobra, naj bi Banting študentom povedal o presnovi ogljikovih hidratov - temi, v kateri sam ni bil močan, in da bi se bolje pripravil, je Banting prebral nedavni članek M. Barrona, ki je bil opisan v zadnjem času v nedeljo zvečer, v katerem je opisal blokado trebušne slinavke. duktalni žolčni kamni in nastala atrofija acinarnih celic (celice, odgovorne za eksokrino funkcijo) 2. Te iste noči je Banting zapisal svojo idejo: “Prebojne pankreatične pasove pri psih. Počakajte na atrofijo acinov, izolirajte skrivnost od celic otočkov, da bi olajšali glukozurijo. «5 Banting je tako, da ni uspel doseči prakse, odšel na univerzo v Torontu, svojo alma mater, kjer se je obrnil k profesorju Johnu MacLeodu, enemu od vodilnih strokovnjakov za presnovo ogljikovih hidratov. Čeprav je profesor sprejel idejo Bantinga brez navdušenja, je za kirurga izločil laboratorij z minimalno opremo in 10 psov. Asistent Banting je postal študent Charles Best Best. Poleti 1921 se je začel eksperiment.

Banting in Best sta začela svoje raziskave z odstranitvijo trebušne slinavke pri psih. Pri nekaterih živalih so raziskovalci odstranili trebušno slinavko, v drugih pa so povezali kanal pankreasa in čez nekaj časa odstranili žlezo. Nato so atrofirali pankreas postavili v hipertonično raztopino in zamrznili. Snov, ki je nastala kot posledica tega po odtajanju, je bila dana psom z odstranjeno trebušno slinavko in ambulanto za sladkorno bolezen. Raziskovalci so zabeležili zmanjšanje ravni glukoze in izboljšanje dobrega počutja živali. Profesor MacLeod je bil navdušen nad rezultati in se odločil, da bo še naprej dokazoval, da Banting in Bestov »ekstrakt trebušne slinavke« resnično deluje.

Novi rezultati eksperimentov z uporabo trebušne slinavke govedi so omogočili razumevanje, da je mogoče to storiti brez zapletenega postopka vezave pankreasnega kanala.

Konec leta 1921 se je raziskovalni skupini pridružil Bertin Collip, biokemik. Z njim, z uporabo frakcijskih padavin z različnimi koncentracijami alkohola in drugimi metodami čiščenja, dobimo izvlečke pankreasnih otočkov, ki jih je mogoče varno vnesti v človeško telo. Je učinkovita in nestrupena snov in je bila uporabljena v prvih kliničnih preskušanjih 6.

Klinična preskušanja

Sprva sta Banting in Best doživela prejeti insulin. Zaradi uvedbe zdravila so imeli oba občutek šibkosti, vrtoglavice, vendar niso opazili toksičnih učinkov zdravila.

Prvi bolnik s sladkorno boleznijo, ki je 11. januarja 1922 prejel insulin. postal 14-letni deček Leonard Thompson. Po prvi injekciji 15 ml insulina ni bilo bistvenih sprememb v bolnikovem stanju, raven glukoze v krvi in ​​urinu se je nekoliko zmanjšala, poleg tega pa je bolnik razvil sterilni absces. Ponovljeno injiciranje je bilo izvedeno 23. januarja in v odgovor na normalizacijo ravni glukoze v krvi bolnika se je vsebnost glukoze in ketonov v urinu zmanjšala, sam fant pa je opazil izboljšanje lastnega počutja 7.

Eden prvih bolnikov, ki so prejemali insulin, je bila hči vodje Vrhovnega sodišča ZDA, Elizabeth Heges Goshet. Presenetljivo je, da je pred začetkom zdravljenja z insulinom imela sladkorno bolezen že 4 leta, zdravljenje, ki ji je omogočilo, da živi do tega dne, je bila huda dieta (približno 400 kcal na dan). Na insulinskem zdravljenju je Elizabeth živela do 73 let in rodila tri otroke.

Nobelova nagrada

Leta 1923 je Nobelov odbor podelil nagrado na področju fiziologije in medicine Bantingu in MacLeodu, kar se je zgodilo le 18 mesecev po prvem poročilu o pripravi na srečanju Združenja ameriških zdravnikov. Ta odločitev je poslabšala že tako težko razmerje med znanstveniki, ker Banting je verjel, da je McLeodov prispevek k izumu insulina zelo pretiran, je po mnenju Bantinga nagrada morala biti razdeljena med njega in njegovega pomočnika Best. Da bi ponovno vzpostavil pravičnost, je Banting del svoje nagrade delil z Bestom in MacLeodom z biokemiki Collipom 8.

Patent za ustvarjanje insulina, ki so ga imeli znanstveniki Banting, Best in Collip, je za 3 dolarje prodal Univerzi v Torontu. Avgusta 1922 je bil sklenjen sporazum o sodelovanju s farmacevtsko družbo Eli Lilly in C o, ki je pomagal vzpostaviti proizvodnjo zdravil v industrijskem obsegu.

Od izuma insulina je minilo več kot 90 let. Zdravila tega hormona se izboljšujejo, od leta 1982 so bolniki že prejemali humani insulin, v devetdesetih letih pa so se pojavili analogi humanega insulina - zdravila z različnim trajanjem delovanja, vendar se moramo spomniti ljudi, ki so začeli ustvarjati to zdravilo, ki vsak dan prihrani milijone ljudi. ljudi

Zgodovina odkrivanja in proizvodnje insulina

Leta 1921 so kanadski zdravniki Frederik Banting in Charles Best iz Toronta uspeli izvleči insulin iz psa. To zdravilo so uvedli za testiranje psa, ki se je imenoval "eksperimentalni" diabetes. Kmalu po injekciji se je bolni pes spet zavedel, stopil na noge in hodil. Nato sta Banting in Best dobila insulin iz telečje trebušne slinavke in 11. januarja 1922 sta injicirala 14-letnega Leonarda Thompsona, ki je umrl zaradi ketoacidoze v bolnišnici v Torontu. Ta prva injekcija ni olajšala njegovega stanja in je celo privedla do zapletov, toda 23. januarja je Leonard spet dobil insulin in njegovo zdravstveno stanje se je začelo izboljševati: njegov apetit se je vrnil, njegova moč se je vrnila in raven sladkorja se je zmanjšala. Leonard Thompson je bil rešen, živel je še 13 let, Banting pa je prejel Nobelovo nagrado za odkritje in plemenit naslov britanske krone.

Zgodovina odkrivanja insulina je polna skrivnosti in dramatičnih dogodkov, ki so še vedno nejasni. Navedel bom različico, ki po mnenju zgodovinarjev znanosti najbolj ustreza resnici.

Frederick Grant Banting (1891–1941) je študiral kirurgijo in kmalu postal zdravnik nekje v podeželskem zaledju. Ko je leta 1916 prišel v vojsko, ni imel časa, da bi dobil diplomo na medicinski fakulteti. Svojo vojaško službo je končal z resno rano na roki, celo govoril o amputaciji. Hand je uspel rešiti. Poskušal je opravljati zasebno prakso, bankrotiral in bil prisiljen delati kot učitelj na medicinski šoli. Bil je slab, vendar ga je odlikovala vztrajnost in celovitost.

Vprašanja, povezana z diabetesom, so ga zanimala jeseni 1920, ko je pripravljal predavanje na to temo za svoje učence. Kakšna je bila ideja, ki ga je zasenčila?

Znano je, da trebušna slinavka opravlja dvojno funkcijo: izloča prebavni encim, hormoni pa se izločajo v njegovih otočkih, vključno z insulinom, ki ga proizvajajo beta celice. Insulin in drugi hormoni vstopijo v kri in encim ?? skozi poseben kanal v želodec, tako da se v živih trebušni slinavki te snovi ne mešajo. Zdaj si zamislite, da izvlečemo insulin na najbolj primitiven način: ubijemo žival, izrežemo žlezo na koščke, jo vtrite v malto in jo zlijemo s slanico, v upanju, da se insulin izloči v to tekočino. Zdi se, da bi se to moralo zgoditi - navsezadnje je v žlezi vedno nekaj insulina! Vendar pa obstaja tudi prebavni sok, in ko smo brisali žlezo, je bila njena struktura motena, tkiva so se spremenila v kašo, sok pa se je zmešal z insulinom in drugimi hormoni.

Kaj se je zgodilo ob istem času? Figurativno rečeno, smrt insulina. Navsezadnje je insulin beljakovina, ki jo razgradi prebavni encim! To je točno to, kar je Banting uresničil? da se "aktivna sestavina" (insulin) razgradi v mletih žlezah pod vplivom prebavnega encima. Iz teh premislekov je mogoče sklepati, da je treba vezati pankreatični kanal in doseči atrofijo njenih tkiv, izločiti prebavni encim (takšne operacije so bile že znane). Po spajanju se bo železo "izsušilo", vendar bo njegov otoček ostal nedotaknjen in bo še naprej izločal insulin; Ta žleza, "prečiščena" iz prebavnih sokov, in jo je treba uporabiti za pripravo insulina.

To je bila ideja Bantinga in z njo, ki je želela dobiti podporo, je prišel k profesorju Mac-Leodu v Torontu.

Mac-Leod je bil znani fiziolog in Banting je bil neuspešni kirurg, učitelj iz državne šole. Poleg tega je imel slabo poznavanje znanstvene terminologije in izražal svoje misli v precej inertnem jeziku. Verjetno je trmast kirurg zahteval pravico do dela v njegovem laboratoriju osem tednov. Tako se je 16. maja 1921 Banting preselil v enega od prostorov laboratorija MacLeoda. Charles Best ga je imenoval za pomočnika, ki je končal četrto leto medicinske šole. Ta študent je lahko opravil preiskavo krvi za sladkor.

Pri nekaterih psih je Banting odstranil trebušno slinavko, da bi povzročil sladkorno bolezen, v drugih pa je povezal kanale, tako da je žleza atrofirala, in po sedmih tednih, v začetku julija, je ugotovil, da poskusi niso dali pozitivnih rezultatov. Način delovanja smo morali spremeniti in ponovno čakati, ker proces atrofije ni bil trenuten, temveč je potreboval precej časa.

27. julija je Banting odstranil atrofirano žlezo od enega psa, ga potrgal v malto, dodal slanico, filtriral ekstrakt in ga injiciral v drugega psa, ki je umrl zaradi sladkorne bolezni. In zgodilo se je čudež: pes je zaživel, dvignil se na noge in odšel!

Res je, da je naslednji dan postal otrdel, Banting pa se je potopil v mračne izračune: izkazalo se je, da je za podaljšanje življenja enega bolnega psa osem dni potreboval pete z atrofirnimi žlezami. Zelo neekonomičen način za pridobivanje insulina!

In tukaj se je Banting spomnil na članek enega fiziologa, v katerem je bilo ugotovljeno, da je bila pri otrocih v celoti oblikovana naprava na otočku, medtem ko so bila tkiva trebušne slinavke, ki proizvajajo prebavni sok, še vedno premalo razvita. Na podlagi tega je Banting ugotovil, da je najprimernejši vir insulina žleza novorojenčkov. Ideja se je izkazala za odlično, do novembra pa sta Banting in West razvila metodo za ekstrakcijo zdravila iz telečjih žlez, januarja leta 1922 pa so že imeli diabetičnega psa, ki je 70 dni živel na injekcijah. Ves ta čas jih profesor McLeod ni motil, ampak so sedeli brez denarja in bili na pragu velikega odkritja.

In potem je prišlo na preizkus insulina pri ljudeh, in Banting, ki je deloval v najboljših medicinskih tradicijah, mu je injiciral zdravilo, nato Vesta in končno, nekaj hudo bolnih bolnikov v Centralni bolnišnici v Torontu. Pozitivni rezultati so bili očitni in v tem trenutku se je profesor Mac-Leod vključil v zadevo z vso močjo svojega laboratorija. Mac-Leod, prvovrstni znanstvenik, je pojasnil in prinesel želeno stanje do odkritja "podeželskega kirurga" in študenta medicine. Zdravilo je bilo očiščeno, informacije o njem so vstopile v tisk in mesto je bilo poplavljeno s pacienti, ki so prosili za pomoč. Poleti 1922 se diabetiki že zdravijo z insulinom, kmalu pa bo podjetje Eli Lilly postavilo svojo proizvodnjo.

McLeod na konferenci pripravi insulinsko poročilo, znanstvena skupnost pa čestitam odkriteljem za njihov uspeh. Pred Bantingom ?? priznanje in Nobelovo nagrado, toda njegovo življenje bo kratko - na začetku druge svetovne vojne bo umrl v letalski nesreči.

Glede na mat. M. Axmanova

"Zgodovina odkrivanja in prejemanja insulina" ?? Kaj morate vedeti o sladkorni bolezni

Zgodovina odkrivanja insulina

Inzulin kot peptidni hormon, ki se proizvaja v beta celicah Langerhansovih otočkov trebušne slinavke. Zagotavljanje prepustnosti celičnih membran za molekule glukoze kot glavne funkcije. Razvrstitev pripravkov insulina in prejem.

Pošljite svoje dobro delo v bazo znanja preprosto. Uporabite spodnji obrazec.

Študenti, podiplomski študenti, mladi znanstveniki, ki bodo uporabili bazo znanja pri študiju in delu, vam bodo zelo hvaležni.

Objavljeno dne http://www.allbest.ru/

Uvod

Insulimn (iz lat. Insula - otok) - hormon peptidne narave, nastane v beta celicah Langerhansovih trebušnih slinavk. Ima večplasten učinek na presnovo v skoraj vseh tkivih.

Glavna funkcija insulina je zagotoviti prepustnost celičnih membran za molekule glukoze. V poenostavljeni obliki lahko rečemo, da se ne le ogljikovi hidrati, ampak tudi vsa hranila delijo na glukozo, ki se uporablja za sintezo drugih molekul, ki vsebujejo ogljik, in je edina vrsta goriva za celične elektrarne - mitohondrije. Brez insulina prepustnost celične membrane do glukoze pade 20-krat, celice pa umrejo od stradanja, presežek sladkorja pa se raztopi v krvi.

Kršitev izločanja insulina zaradi uničenja beta celic - absolutno pomanjkanje insulina - je ključni element pri patogenezi diabetesa tipa 1. Kršitev učinka insulina na tkivo - relativno pomanjkanje insulina - ima pomembno mesto pri razvoju sladkorne bolezni tipa 2. t

Zgodovina odkrivanja insulina

Zgodovina odkrivanja insulina je povezana z imenom ruskega zdravnika I.M. Sobolev (druga polovica 19. stoletja), ki je dokazal, da raven sladkorja v človeški krvi ureja poseben hormon trebušne slinavke.

Leta 1922 je insulin, izoliran iz trebušne slinavke živali, prvič predstavil desetletnemu diabetičnemu fantu. rezultat je presegel vsa pričakovanja, leto kasneje pa je ameriško podjetje Eli Lilly izdalo prvi živalski insulinski pripravek.

Po prejemu prve industrijske serije insulina v naslednjih nekaj letih je bil prehoden velik način njegove izolacije in čiščenja. Posledično je hormon postal na voljo bolnikom s sladkorno boleznijo tipa 1. membranska insulinska hormonska pankreasna membrana

Leta 1935 je danski raziskovalec Hagedorn optimiziral učinek insulina v telesu tako, da je predlagal podaljšano zdravljenje.

Prvi insulinski kristali so bili pridobljeni leta 1952, leta 1954 pa je angleški biokemik G. Senger dešifriral strukturo insulina. Razvoj metod za čiščenje hormona iz drugih hormonskih snovi in ​​produktov razgradnje insulina je omogočil pridobitev homogenega insulina, imenovanega enokomponentni insulin.

V zgodnjih 70. letih. Sovjetski znanstveniki A. Yudaev in S. Shvachkin predlagali kemično sintezo insulina, vendar izvajanje te sinteze na industrijski ravni je bilo drago in nedonosno.

V prihodnosti se je postopno izboljšala stopnja čiščenja insulinov, kar je zmanjšalo težave, ki jih povzročajo alergije na insulin, okvarjeno delovanje ledvic, motnje vida in odpornost na imunski insulin. Najučinkovitejši hormon je bil potreben za nadomestno zdravljenje pri sladkorni bolezni - homologni insulin, tj. Humani insulin.

V osemdesetih letih je napredek v molekularni biologiji omogočil sintezo obeh verig človeškega insulina z uporabo E.coli, ki sta bili nato povezani v biološko aktivno hormonsko molekulo, rekombinantni insulin pa je bil pridobljen na Inštitutu za bioorgansko kemijo Ruske akademije znanosti z gensko spremenjenimi sevi E.coli.

Uporaba afinitetne kromatografije je bistveno zmanjšala vsebnost kontaminirnih proteinov z višjo molekulsko maso kot insulin v pripravku. Ti proteini vključujejo proinzulin in delno razcepljene proinzuline, ki so sposobni inducirati produkcijo antiinsulinskih protiteles.

Uporaba humanega insulina od začetka zdravljenja zmanjša pojav alergijskih reakcij. Človeški insulin se hitreje absorbira in ima, ne glede na obliko zdravila, krajši čas delovanja kot živalski insulin. Človeški insulini so manj imunogeni kot prašiči, zlasti mešani goveji in prašičji insulini.

Tipi insulina

Pripravki insulina se razlikujejo po stopnji čiščenja; vir proizvodnje (govedo, prašiči, ljudi); snovi, dodane raztopini insulina (podaljšanje njenega delovanja, bakteriostatiki itd.); koncentracija; vrednost pH; ICD mešanje z IPD.

Pripravki insulina se razlikujejo glede na vir. Prašičji in goveji insulin se od človeka razlikuje po aminokislinski sestavi: bovini v treh aminokislinah in prašičih v eni. Ni presenetljivo, da se pri zdravljenju z govejim insulinom neželeni učinki pojavijo veliko pogosteje kot pri zdravljenju s prašičjim ali humanim insulinom. Te reakcije so izražene v imunološki odpornosti proti insulinu, alergiji na insulin, lipodistrofiji (spremembi podkožnega tkiva na mestu injiciranja).

Kljub očitnim pomanjkljivostim govejega insulina se še vedno pogosto uporablja v svetu. In vendar, imunološko, so pomanjkljivosti govejega insulina očitne: v nobenem primeru ni priporočljivo predpisati ga bolnikom z novo diagnosticirano sladkorno boleznijo, nosečnicami ali kratkotrajno insulinsko terapijo, na primer v perioperativnem obdobju. Negativne lastnosti govejega insulina se ohranijo tudi, če se uporabljajo v mešanici s prašiči, zato se tudi mešani (prašičji + goveji) insulini ne smejo uporabljati za zdravljenje teh kategorij bolnikov.

Človeški insulinski pripravki za kemijsko strukturo so popolnoma identični humanemu insulinu.

Glavni problem biosintetične metode pridobivanja humanega insulina je popolno čiščenje končnega produkta iz najmanjših nečistoč uporabljenih mikroorganizmov in njihovih metabolnih produktov. Nove metode nadzora kakovosti zagotavljajo, da človeški biosintetični insulin ne vsebuje nobenih škodljivih nečistoč; zato njihova stopnja čiščenja in učinkovitost zniževanja glukoze izpolnjujejo najvišje zahteve in so skoraj enaki. Neželeni stranski učinki, odvisno od nečistoč, teh zdravil nimajo insulina.

Trenutno se v medicinski praksi uporabljajo tri vrste insulinov:

- kratkega dosega s hitrim začetkom učinka;

- povprečno trajanje ukrepa;

- dolgim ​​delovanjem s počasnim učinkom.

Tabela 1. Značilnosti komercialnih pripravkov insulina

Primeri (trgovska imena)

Metilparaben m-krezol fenol

NaCl glicerin Na (H) PO4 Na acetat

Človek Svinjski bik

Aktrapid-NM, Humulin-R Aktrapid, Aktrapid-MS insulin za injekcije (ZSSR, ni več proizveden)

Človek Svinjski bik

Protafan-NM, humani-protafan-MS protamin-insulin (ZSSR, ni več proizveden)

Človek Svinjski bik

Monotard-NM, Humulin-cink Monotard-MS, Lente-MS Lente

Kratkodelujoči insulin (ICD) - navaden insulin - je kratko delujoč kristalni insulin, ki je topen pri nevtralnem pH, katerega učinek se razvije v 15 minutah po subkutani uporabi in traja 5-7 ur.

Prvi podaljšani insulin (SDI) je nastal v poznih 30-ih letih, tako da so lahko bolniki injicirali manj pogosto kot pri uporabi ICD, če je bilo mogoče enkrat na dan. Za povečanje trajanja delovanja se vsi drugi pripravki insulina modificirajo in, kadar se raztopijo v nevtralnem mediju, tvorijo suspenzijo. Vsebujejo protamin v fosfatnem pufru - protamin cink-inzulin in NPH (nevtralni protamin Hagedorn) - NPH-inzulin ali različne koncentracije cinka v acetatnem pufru - ultralente insulin, trak, sedemdeset.

Srednje trajni pripravki insulina vsebujejo protamin, ki je povprečni protein m. 4400, bogata z argininom in pridobljena iz mavričnega šarenke. Za oblikovanje kompleksa je potrebno razmerje protamina in insulina 1:10. Po subkutanem dajanju proteolitični encimi uničijo protamin, kar omogoča, da se insulin absorbira.

NPH-insulin ne spremeni farmakokinetičnega profila regulatornega insulina z njim. NPH-inzulin je bolj zaželen kot insulinski trak kot sestavni del povprečnega trajanja delovanja v terapevtskih mešanicah, ki vsebujejo običajni insulin.

V fosfatnem pufru vsi insulini zlahka tvorijo kristale s cinkom, vendar so samo kristali govejega insulina dovolj hidrofobni, da zagotovijo počasno in enakomerno sproščanje insulina, značilnega za ultralente. Cinkovi kristali prašičjega inzulina se raztopijo hitreje, učinek pride prej, trajanje delovanja je krajše. Zato ni zdravila ultralente, ki vsebuje samo prašičji insulin. Monokomponentni prašičji insulin se proizvaja pod imenom suspenzija insulina, insulin nevtralna, insulin izofan, insulinski aminokinurid.

Insulinski trak je mešanica 30% insulina semilenta (amorfni insulinski precipitat z cinkovimi ioni v acetatnem pufru, katerega učinek razmeroma hitro razpade) z 70% insulina ultralente (slabo topen kristalni insulin, ki ima poznejši začetek in podaljšan učinek). Ti dve komponenti zagotavljata kombinacijo z relativno hitro absorpcijo in stabilnim dolgoročnim delovanjem, zaradi česar je inzulinski trak priročno terapevtsko sredstvo.

Proizvodnja insulina

Človeški insulin se lahko proizvaja na štiri načine:

1) popolna kemijska sinteza;

2) ekstrakcija iz trebušne slinavke osebe (obe teh metod nista primerni zaradi neučinkovitosti: nezadosten razvoj prve metode in pomanjkanje surovin za množično proizvodnjo po drugi metodi);

3) s polsintetično metodo z uporabo encimsko-kemijske substitucije na položaju 30 verige B aminokisline alanina v prašičnem insulinu s treoninom;

4) biosintetična metoda za tehnologijo genskega inženiringa. Zadnji dve metodi omogočata pridobitev humanega insulina visoke čistosti.

Trenutno se humani insulin večinoma dobiva na dva načina: s spreminjanjem svinjskega insulina s sintetično-encimsko metodo in z metodo genskega inženiringa.

Insulin je bil prvi protein, pridobljen za komercialne namene z uporabo tehnologije rekombinantne DNA. Obstajata dva glavna pristopa za pridobivanje gensko spremenjenega humanega insulina.

V prvem primeru ločeni (različni sevi proizvajalcev) proizvajajo obe verigi, ki ji sledi zlaganje molekule (tvorba disulfidnih mostov) in ločevanje izooblik.

V drugem pripravku v obliki prekurzorja (proinzulina), ki mu sledi encimsko cepitev s tripsinom in karboksipeptidazo B na aktivno obliko hormona. Trenutno je najprimernejše, da dobimo inzulin kot predhodnik, ki zagotavlja pravilno zapiranje disulfidnih mostov (v primeru ločene proizvodnje verig, izvedemo zaporedne cikle denaturacije, ločimo izoforme in renaturacijo).

V obeh pristopih je mogoče bodisi posamično pridobiti izhodne komponente (A in B verige ali proinzulin) ali kot del hibridnih proteinov. Poleg A- in B-verig ali proinzulina je lahko prisotna tudi v sestavi hibridnih proteinov:

- nosilni protein, ki prenaša fuzijski protein v periplazmični prostor celice ali gojišča;

- komponento afinitete, ki močno olajša izbiro hibridnega proteina.

Hkrati sta lahko obe komponenti sočasno prisotni v sestavi hibridnega proteina. Poleg tega lahko pri ustvarjanju hibridnih proteinov uporabimo načelo multidimenzionalnosti (to je, da je v hibridnem proteinu prisotnih več kopij ciljnega polipeptida), kar omogoča bistveno povečanje donosa ciljnega produkta.

V Združenem kraljestvu sta bili obe verigi humanega insulina sintetizirani z uporabo E.coli, ki sta bili nato povezani z biološko aktivno molekulo hormona. Da bi enocelični organizem na svojih ribosomih sintetiziral molekule insulina, je potrebno zagotoviti potreben program, to je, da mu vnesemo hormonski gen.

Kemično dobimo gen, ki programira biosintezo insulinskega prekurzorja ali dveh genov, ki ločeno programirata biosintezo insulinskih A in B verig.

Naslednja stopnja je vključitev gena za prekurzor insulina (ali verig gena ločeno) v genom E. coli, posebnega seva E. coli, gojenega v laboratorijskih pogojih. To nalogo opravlja genski inženiring.

Plazmid z ustreznim restrikcijskim encimom izoliramo iz E.coli. Sintetični gen je vstavljen v plazmid (kloniranje s funkcionalno aktivnim C-terminalnim delom B-galaktozidaze E. coli). Kot rezultat, E.coli pridobi sposobnost sintetiziranja proteinske verige, ki jo sestavljajo galaktozidaza in insulin. Sintetizirani polipeptidi se kemično cepijo iz encima in nato očistijo. V bakteriji se na bakterijsko celico sintetizira približno 100.000 molekul insulina.

Naravo hormonske snovi, ki jo proizvaja E. coli, določa gen, ki je vstavljen v genom enoceličnega organizma. Če je kloniran insulinski prekurzorni gen, bakterija sintetizira prekurzor insulina, ki ga nato izpostavimo obdelavi z restrikcijskimi encimi, da odstranimo prepity z izolacijo C-peptida, kar povzroči biološko aktiven insulin.

Za pridobitev prečiščenega humanega insulina je hibridni protein, izoliran iz biomase, izpostavljen kemični encimski transformaciji in ustreznemu kromatografskemu čiščenju (frontalna, gelska permeacija, anionska izmenjava). Rekombinantni insulin smo pridobili na Inštitutu RAS z uporabo gensko spremenjenih sevov E.coli. Prekurzor, hibridni protein, izražen v količini 40% celotnega celičnega proteina, ki vsebuje preproinzulin, se sprosti iz gojene biomase. Njena transformacija v inzulin in vitro poteka v enakem zaporedju kot in vivo - vodilni polipeptid se cepi, preproinzulin se pretvori v insulin skozi faze oksidativne sulfitolize, čemur sledi reduktivno zapiranje treh disulfidnih vezi in encimska izolacija vezave C-peptida. Po seriji kromatografskih čiščenj, vključno z ionsko izmenjavo, gelom in HPLC (tekočinska kromatografija visoke ločljivosti), dobimo humani insulin visoke čistosti in naravne aktivnosti.

Uporabimo lahko sev s plazmidno vgrajeno nukleotidno sekvenco, ki izraža fuzijski protein, ki je sestavljen iz linearnega proinzulina in Staphylococcus aureus proteina fragmenta A, vezanega na njegov N-terminal.

Gojenje nasičene biomase celic rekombinantnega seva zagotavlja začetek proizvodnje hibridnega proteina, izolacijo in zaporedno transformacijo, ki v cevi vodi do insulina.

Druga možnost je možna: v bakterijskem ekspresijskem sistemu se izkaže fuzijski rekombinantni protein, ki sestoji iz človeškega proinzulina in polihistidinskega repa, ki je nanj vezan preko metioninskega ostanka. Izolira se z uporabo kelatne kromatografije na Ni-agaroznih kolonah iz inkluzijskih teles in digerira s cianogen bromidom.

Izolirani protein je S-sulfoniran. Kartiranje in masna spektrometrična analiza pridobljenega proinzulina, očiščenega z ionsko izmenjevalno kromatografijo na anionskem izmenjevalniku in RP (reverzna faza) HPLC (tekočinska kromatografija visoke ločljivosti), kaže prisotnost disulfidnih mostov, ki ustrezajo disulfidnim mostom iz naravnega humanega proinzulina.

V zadnjem času je bila posebna pozornost posvečena poenostavitvi postopka pridobivanja rekombinantnega insulina z metodami genskega inženiringa. Na primer, fuzijski protein, ki sestoji iz vodilnega peptida interlevkina 2, vezanega na N-konec proinzulina, lahko dobimo preko lizinskega ostanka. Protein je učinkovito izražen in lokaliziran v inkluzijskih telesih. Po izolaciji se protein razcepi s tripsinom, da nastane insulin in C-peptid.

Nastali insulin in C-peptid očistimo z RP-HPLC. Pri ustvarjanju fuzijskih struktur je masno razmerje nosilnega proteina na ciljni polipeptid zelo pomembno. C-peptide povežemo s principom glave in repa z aminokislinskimi ločevalci, ki nosijo restrikcijsko mesto Sfi I in dvema argininskima ostankoma na začetku in na koncu vmesnika za nadaljnje cepitev proteina s tripsinom. Produkti HPLC cepitve kažejo, da se C-peptid razcepi kvantitativno, in to omogoča uporabo metode multimernih sintetičnih genov za proizvodnjo ciljnih polipeptidov v industrijskem obsegu.

Zaključek

Diabetes mellitus je kronična bolezen, ki jo povzroča absolutna ali relativna pomanjkanje insulina. Zanj je značilna globoka presnovna motnja ogljikovih hidratov s hiperglikemijo in glukozurijo ter drugimi presnovnimi motnjami, ki so posledica številnih genetskih in zunanjih dejavnikov.

Inzulin doslej služi kot radikalen in v večini primerov edini način za ohranitev življenja in invalidnosti bolnikov s sladkorno boleznijo. Pred prejemanjem in uvedbo insulina v kliniko leta 1922-1923. Bolniki z diabetesom mellitusom tipa I so čakali na smrtni izid za eno do dve leti po začetku bolezni, kljub uporabi najbolj izčrpavajočih diet. Bolniki s sladkorno boleznijo tipa I potrebujejo vseživljenjsko nadomestno zdravljenje z insulinom. Prenehanje zaradi različnih vzrokov za redno vnašanje insulina vodi do hitrega razvoja zapletov in neposredne smrti pacienta.

Trenutno je sladkorna bolezen glede razširjenosti tretje mesto po srčno-žilnih in onkoloških boleznih. Po podatkih Svetovne zdravstvene organizacije je razširjenost sladkorne bolezni med odraslim prebivalstvom v večini regij na svetu 2-5% in obstaja tendenca povečanja števila bolnikov skoraj dvakrat vsakih 15 let. Kljub očitnemu napredku na področju zdravstvenega varstva se število bolnikov, odvisnih od insulina, vsako leto povečuje in trenutno samo v Rusiji znaša približno 2 milijona.

Ustvarjanje zdravil domačega genskega insulina odpira nove možnosti za reševanje mnogih problemov ruske diabetologije, da bi rešili življenja milijonov ljudi s sladkorno boleznijo.

1. Biotehnologija: učbenik za univerze / ur. N.S. Egorova, V.D. Samuilova.- M.: Visoka šola, 1987, str. 15-25.

2. Gensko spremenjen humani insulin. Izboljšanje učinkovitosti kromatografskega ločevanja z uporabo načela bifunkcionalnosti. Romanchikov, A.B., Yakimov, S.A., Klyushnichenko, V.E., Arutunyan, A.M., Vulfson, A.N. // Bioorganska kemija, 1997 - 23, št

3. Egorov N. S., Samuilov V. D. Sodobne metode ustvarjanja industrijskih sevov mikroorganizmov // Biotehnologija. Princ 2. M: Višja šola, 1988. 208 str.

4. Imobilizacija tripsina in karboksipeptidaze B na modificiranem silicijevem dioksidu in njihova uporaba pri pretvorbi rekombinantnega humanega proinzulina v insulin. / Kudryavtseva N.E., Zhigis L.S., Zubov V.P., Vulfson A.I., Maltsev K.V., Rumsh L.D. // Chem.-Pharmacy. J., 1995 - 29, št. 1, str. 61 - 64.

5. Osnove farmacevtske biotehnologije: študijski vodnik / ETC. Prishchep, V.S. Chuchalin, K.L. Zaikov, L.K. Mikhalev. - Rostov na Donu: Phoenix; Tomsk: NTL Publishing, 2006.

6. Sinteza fragmentov insulina in preučevanje njihovih fizikalno-kemijskih in imunoloških lastnosti. / Panin L.E., Tuzikov F.V., Poteryaeva ON, Maksyutov A.Z., Tuzikova N.A., Sabirov A.N. // Bioorganic Chemistry, 1997–23, št. 12, str. 953–960

O Nas

Kršitev časa menstruacije vsaj enkrat v življenju je vsaka ženska. Konec koncev se lahko cikel spremeni iz več razlogov. In če neuspeh ni sam, je treba sprejeti ukrepe za ponovno vzpostavitev normalnega delovanja reproduktivnega sistema.